В научном центре диагностируют болезни сельскохозяйственных и домашних животных. В том числе экзотических. Например, попугаев. Сотрудники ВГНКИ также разработали тест-систему для диагностики новой коронавирусной инфекции у животных.
- «Мы занимаемся выявлением вируса SARS-CoV-2 (название коронавируса, вызывающего инфекцию COVID-19) у собак, кошек и норок. Надо отметить, что первая кошка, положительная на SARS-CoV-2, в России была выявлена именно в нашей лаборатории», – рассказала Светлана Яцентюк, заведующая отделом генодиагностики инфекционных болезней животных ФГБУ «ВГНКИ».
Метод ПЦР (метод полимеразной цепной реакции) был разработан американским биохимиком Кэри Му́ллисом в 1983 году. За создание ПЦР в 1993 году Муллис получил Нобелевскую премию по химии. Полимеразная цепная реакция – это циклический процесс, при котором многократно удваивается определенный участок нуклеиновой кислоты – ДНК или РНК возбудителя инфекционной болезни. В результате в пробирке накапливается значительное количество генетического материала патогена, чтобы его определить.
Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные бактерии или вирусы, когда генетический материал представлен всего одной молекулой нуклеиновой кислоты. ПЦР-диагностика обнаруживает возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами это сделать невозможно.
- «В отличие от серологических методов метод ПЦР является прямым методом диагностики, то есть позволяет выявлять наличие генетического материала инфекционного агента: бактерии, вируса, грибка или простейшего. Серологические же методы выявляют иммунный ответ организма на попадание инфекционного агента», – пояснила Светлана Яцентюк.
Генетический материал возбудителей инфекционных болезней животных может быть представлен ДНК, как, например, у возбудителя панлейкопении кошек, или РНК – как у возбудителя COVID-19. Для РНК-содержащих вирусов существует модификация метода – ОТ-ПЦР, или ПЦР с обратной транскрипцией.
- «Чтобы работать с этими вирусами, необходимо добавление дополнительной стадии – стадии обратной транскрипции. Когда на матрице РНК формируется матрица ДНК, с которой уже происходит полимеразная цепная реакция», – говорит Светлана Яцентюк.
ПЦР проводят в специальном приборе – амплификаторе, функция которого заключается в изменении температурного режима пробирок с реакционной смесью. Реакция занимает 2–3 часа. За это время в амплификаторе происходит 30–40 циклов удвоения нужного участка ДНК. Каждый цикл состоит из трех стадий:
– нагрева до 94–95 градусов для расплетения спирали ДНК;
– охлаждения до 50–68 градусов для связи затравок с ДНК-матрицей;
– и нагрева до 72 градусов для комплементарного достраивания ДНК ферментом полимераза.
После 40 циклов из одного образца ДНК образуется 10 (12) копий.
Наработанное в результате ПЦР количество копий ДНК определяют или с помощью гибридизационно-флуоресцентной детекции в режиме реального времени, или с помощью электрофоретической детекции.
Клинико-диагностический центр ФГБУ «ВГНКИ»:
г. Москва, 2-й Хорошевский проезд, д. 5, станция метро «Беговая»
Телефоны: 8 (495) 940-12-61, 8 (495) 941-23-30, 8 (499) 256-80-33
Электронная почта: cmd@vgnki.ru
