При проведении ПЦР отсутствие сигнала еще не всегда означает, что животное не заражено. Анализ может не сработать, если клетки в образце были разрушены не полностью, ДНК или РНК не удалось выделить либо в пробе остались вещества, мешающие реакции. В таком случае результат будет отрицательным, хотя возбудитель может присутствовать.
Чтобы контролировать проведение анализа, в диагностических тестах используют специальный контрольный материал. Обычно его добавляют в пробу перед исследованием. Однако такой контроль не всегда позволяет проверить самый первый этап — удалось ли разрушить клетки исследуемого материала и получить из них нуклеиновые кислоты.
Авторы работы предложили использовать в качестве контроля гены самого животного, которые уже присутствуют в образце. Они проходят все этапы обработки вместе с пробой и позволяют оценить, правильно ли был подготовлен материал и сработала ли ПЦР.
Исследователи проанализировали восемь генов крупного рогатого скота, овец и коз и нашли в них участки, подходящие для такого контроля. Затем ученые разработали праймеры и зонды — короткие генетические последовательности, необходимые для обнаружения выбранных участков. Для контроля ПЦР с обратной транскрипцией предложено использовать участки генов бета-галактозидазы и нейраминидазы.
Если ген животного обнаружен, а генетический материал возбудителя — нет, отрицательный результат можно считать более надежным. Если анализ не выявил ни возбудителя, ни контрольный ген, результат требует дополнительной проверки, а исследование, возможно, придется повторить.
Опубликованная работа описывает первый этап разработки. Авторы подобрали генетические мишени и создали праймеры и зонды, но не приводят результатов их лабораторной проверки на биологических образцах. Перед применением такой контроль необходимо испытать в составе конкретных диагностических тестов.
